PENGUJIAN PROTEIN DAN ASAM AMINO

I. TUJUAN

1.      Mengetahui kadar ikatan peptide dalam suatu senyawa asam amino.

2.      Mengetahui bahan yang diujikan mengandung protein.

3.      Mengetahui beberapa sifat asam amino dan proses denaturasi protein.

II. TINJAUAN PUSTAKA

            Asam amino adalah senyawa yang mengandung gugus karboksil dan gugus amin. Asam amino juga merupakan senyawa monomer dari protein, jenis asam amino dibedakan dari letak gugus amina yang terikat pada atom C ( Hart, 1987 ).

            Asam amino merupakan bahan yang penting dan dibutuhkan oleh tubuh. Berdasarkan kebutuhan akan asam amino tersebut, ada beberapa jenis asam amino yang dapat disintesis oleh tubuh dan ada jenis asam amino yang tidak dapat disintesis oleh tubuh. Asam amino yang dapat disintesis oleh tubuh disebut juga asam amino non essensial, sedangkan asam amino yang tidak dapat disintesis oleh tubuh disebut juga asam amino essensial, asam amino jenis ini diperoleh dari makanan yang dimakan oleh tubuh ( Wilbraham, 1998 )

Struktur asam amino mempunyai 2 buah fungsi yaitu gugus karboksilat (-COOH ) dan gugus amina ( NH₂ ). Rumus umum asam amino dapat digambarkan sebagai berikut : Gugus R beraneka jenisnya tidak hanya terbatas pada gugus alkil saja ( Hart, 1987 ).

            Protein merupakan polimer alam yang terjadi melalui reaksi polimerisasi kondensasi dari monomer asam amina. Asam amino berikatan dengan asam amino lainnya membentuk rantai melalui ikatan peptide. Setiap ikatan peptide antara 2 molekul asam amino akan dilepaskan molekul air. Ikatan 2 buah asam amino melalui reaksi :

III. METODOLOGI

A. Alat dan Bahan

1. Larutan Cystin
2. Larutan Cystein
3. Larutan Alanin
4. Larutan Phenylalanin
5. Larutan Aquades
6. Larutan Glycin
7. Larutan Methionin
8. Larutan Tryptophan
9. Larutan Tyrosin
10. Tabung reaksi
11. Pipet tetes
12. Kaki tiga
13. Kompor Spiritus
14. Vortex
15. Gelas Beker
16. NaNO3 1 %
17. Reagen Millon
18. Ninhidrin 0,2 %
19. HNO₃ Pekat
20. NaOH 40 %
21. HCl 15 %

IV. HASIL PENGAMATAN

Asam Amino	NT	XT	MTS	LST
Cystin	++	-	-	-
Cystein	+++	-	-	-
Alanin	++++++	-	-	+
Fenilalanin	+++++++	-	-	-
Glycine	+++++++++	-	-	-
Methianin	+++++	-	-	-
Tyrosin	++++	+	+	-
Trypthopan	++++++++	++	-	-
Aquades	+	-	-	-

Ket : + = Tingkat Kepekatan

         -  = Tidak terjadi perubahan ( reaksi negatif )   

Pengujian Protein

Biuret Test

Protein	Intensitas warna violet
Casein	++ ( Ungu Keruh )
Albumin	+++ ( Ungu / Violet )
Glycin	+  ( Bening )

Denaturasi dengan Pemanasan dan pH Ekstrim

Awal	Perlakuan 1	Perlakuan 2	Kesimpulan
Casein : Cair Putih ( c ) keruh Albumin : Cair ( A ) bening	HCl : C = putih endapan di bawah A = tetap NaOH : C = Coklat kental A = Cair kuning bening NaCl : C = tetap A = putih keruh berbuih HNO3 : C = kuning keruh A = kuning bening Aquadest : C = tetap A = putih keruh	NaOH : C = 2 lapis, atas keruh, bawah bening A = putih keruh kecoklatan HCl : C = kuning kecoklatan endapan banyak A = kuning berbentuk endapan putih	R D R R D D D D D D

V. PEMBAHASAN

A. Pengujian Umum Asam Amino

Pada pengujian asam amino ini digunakan ninhidrin tes. Tes ini bertujuan untuk mengetahui apakah bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini mengandung asam amino atau tidak. Tes ini dapat bereaksi dengan semua asam amino yang berada pada kondisi keasaman tertentu yaitu antara pH 4-8. Reaksi ini akan menimbulkan warna violet atau ungu. Asam amino prolin dan hidroksi prolin dapat bereaksi dengan tes ini namun menghasilkan warna kuning.

Reaksi umum yang terjadi adalah :

B. Pengujian Kelompok Asam Amino

1. Uji Xanthoproteic

Pada pengujian xanthoproteic bertujuan untuk mengetahui adanya gugus aromatik pada  bahan yang akan diujikan. Pada prinsipnya asam amino yang mengandung gugus aromatik akan membentuk derivate/turunan nitro yang berwarna kuning bila dipanaskan dengan asam nitrat pekat. Garam dari derivate tersebut akan berwarna oranye. Fenilalanin akan bereaksi negatif atau positif lemah.

Berdasarkan hasil pengamatan, reaksi tirosin dalam uji ini :

2. Uji Millon                           

Pada pengujian millon ini dimaksudkan untuk mengetahui apakah bahan-bahan asam amino yang diuji mengandung hidroksi benzena. Asam amino yang mengandung hidroksi benzene akan bereaksi dengan reagen millon dan menghasilkan kompleks berwarna merah. Hanya asam amino fenolik, yaitu tirosin dan derivatnya yang memberikan reaksi positif terhadap reagen Millon.

Pada pelaksanaan pengujian, larutan yang sudah dicampur dengan reagen millon dipanaskan untuk mempercepat reaksi. Setelah itu larutan didinginkan agar tidak terjadi hidrolisis yang berlebih saat terjadi pemanasan karena penguapan yang akan melepaskan zat-zat penting ke udara.

3. Uji Lead Sulphide

Uji ini bertujuan untuk mengetahui apakah bahan-bahan amino yang digunakan mengandung belerang atau tidak.

Asam amino sistin dan sistein bila dipanaskan dalam alkali kuat, beberapa sulfurnya akan diubah menjadi natrium sufida yang dapat dideteksi dengan metode pengendapan sebagai senyawa lead sulphide. Sulfur dari methionin tidak dapat dipengaruhi oleh reaksi ini. Adapun reaksi Sisetin terhadap uji lead sulphide :

C. Pengujian Protein

1. Pengujian Biuret

Adapun tujuan dari pengujian biuret adalah  untuk mengetahui adanya ikatan peptida dalam sampel protein yang akan diuji. Uji ini dinilai positif jika terjadi reaksi berupa warna violet ( ungu ).

Mula-mula dalam pengujian ini ditambahkan 5 tetes CuSO₄ ke 2 ml larutan protein. Penambahan CuSO₄ dalam pengujian ini dikarenakan CuSO₄ dapat bereaksi dengan senyawa yang mengandung 2 atau lebih ikatan peptida, sehingga dapat diketahui apakah protein yang diuji mengandung ikatan peptida atau tidak. Setelah itu ditambahkan lagi NaOH 40 % agar ion Na⁺ dalam reaksinya dapat mengikat ion SO₄^2- sehingga membentuk senyawa NaSO₄ yang akan menunjukkan warna semakin pekat dan larutan divortex agar homogen.

Reaksi umum yang terjadi adalah :

2. Denaturasi dengan Pemanasan dan pH Ekstrim

Denaturasi merupakan perubahan struktur/formasi yang berbeda dari sturktur aslinya yang disebabkan oleh perubahan kondisi lingkungan tertentu. Pengujian denaturasi protein ini beryujuan untuk mengetahui sejauh mana pengaruh lingkungan terhadap perubahan struktur protein. Denaturasi sering meliputi perubahan kimia dalam molekul protein, protein yang mengalami denaturasi mengakibatkan larutan menjadi kecil dan aktivitas fisiologi menghilang.

VI. KESIMPULAN

1.      Bahan-bahan yang diujikan dalam percobaan ini merupakan asam amino

2.      Asam amino yang mengandung gugus aromatik adalah tirosin dan triptofan.

3.      Asam amino yang mengandung unsur S  adalah sistein.

4.      Tirosin adalah asam amino yang mengandung hidroksi benzene.

5.      Casein dan Albumin mengalami denaturasi yang reversible oleh larutan HCl, sedangkan larutan NaOH reversible.